Novoprotein發布「一管式」 高效mRNA合成工藝

「一管式」mRNA合成工藝涵蓋了線性化範本製備-體外轉錄（In Vitro Transcription, IVT）-酶法加帽流程，整個過程省去了傳統工藝中兩步純化步驟，大大提高的mRNA的生產效率。

在該工藝中，Novoprotein探索了不同限制性內切酶在不同IVT體系中，酶切後不純化，直接進行IVT實驗在產量、完整性以及加帽率等方面的表現，發現不純化得到的mRNA質量與純化無明顯差別，但因為省略了一步純化工藝，大大減少了線性化質粒範本的損失，因此最終得到的mRNA產量更高。

圖例）分別使用BsaI和BspQI兩種限制性內切酶進行酶切，對比酶切後純化與不純化工藝，在mRNA產量、完整性以及加帽率方面無明顯差異。

體外合成的RNA需要通過一定的合成過程完成5’端帽結構的添加，從而形成完整的mRNA結構。mRNA的完整性確保了蛋白質的準確翻譯，5’-Cap帽結構修飾可以保護mRNA免受5'-外切酶活性降解、有效促進翻譯的起始、降低免疫原性。常用的加帽工藝有兩類，一類是在IVT結束後，通過牛痘病毒加帽酶和2’-O-甲基轉移酶的共同作用，完成Cap1的修飾；一類是在IVT過程中，通過在體系內引入帽類似物，完成帽結構的修飾。兩種方式在工藝、結果以及智慧財產權壁壘等方面各不相同。

由於帽類似物的專利限制，越來越多的mRNA研究人員傾向使用酶法加帽。然而傳統的酶法加帽工藝存在IVT與加帽反應體系不相容問題，導致在IVT結束後，必須通過一步純化工藝置換反應緩衝液後才可以進行酶法加帽，這無疑增加了後期放大工藝的複雜性。Novoprotein經過不斷地研究探索，開創性推出「一管式」酶法加帽工藝，相較于傳統工藝，「一管式」工藝具備生產效率高、mRNA產量高等明顯優勢：

一管式合成Luciferase mRNA與傳統工藝相比，mRNA檢測結果無明顯差異：


一管式合成eGFP mRNA與傳統工藝相比，mRNA檢測結果無明顯差異：


Novoprotein「一管式」mRNA合成工藝已提交發明專利申請（申請號：202310338519X），在論壇上，朱化星博士強調，Novoprotein致力於為整個行業提供可靠有效的整體解決方案，除了原材料的供應鏈支持，更希望能夠協助客戶建立一些新的方法學研究，為下游客戶賦能。因此，在合作模式上也是開放式合作，專利無償開放給所有合作客戶，共同促進mRNA行業發展

NovoproteinmRNA原料/服務一站式解決方案：